一、Tris缓冲液pH范围
Tris缓冲液在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂,它的常用有效pH范围是在“中性"范围,如:
Tris缓冲液:pH=7.5~9
Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5
Tris-磷酸盐缓冲液:pH=5.0~9.0
二、Tris缓冲液的配制方法
1.某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制:将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与下表所示相应体积(单位:ml)的0.1ml/L HCl混合,加水将体积调至100ml。
2.Tris-HCl缓冲液的两种配置方法
第一种方法是分别配制0.05 mol/L Tris和0.05 mol/L HCl溶液,然后按常用表中所列体积混合即可。
但是由于标准浓度的稀盐酸不易配制,所以常用另一种方法:以配置1 L 0.1 mol/L的Tris-HCl缓冲液为例:先称12.11 g Tris碱溶于950 mL~970 mL 去离子水中,边搅拌边滴加4 N HCl,用pH计测定溶液pH值至所需的pH值,然后再加水补足到1 L。
三、其他Tris衍生缓冲液
除了Tris-HCl之外,Tris还有多种衍生缓冲液:
TBS=Tris-HCl+ NaCl+KCl,常用于清洗免疫染色的组织或Western Blotting中的蛋白印迹膜等;
TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20,做Western Blotting中常用的一种洗膜缓冲液;
TE=Tris-HCl+EDTA,对DNA的碱基有保护性,常被用于DNA的稳定和储存;
TAE=Tris base+乙酸+EDTA,是大片段DNA短时间电泳时广泛使用的缓冲系统;
TBE=Trisbase+硼酸+EDTA,适用于长时间DNA电泳,对较小片段分离效果较好。
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